審計追蹤液相色譜的液質聯用技術介紹
更新時間：2019-01-10
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審計追蹤液相色譜的液質聯用技術介紹
液質聯用，即審計追蹤液相色譜 -質譜聯用技術，是目前很好的檢測技術，以其快速的分離能力、超高的靈敏度著稱.本文將介紹液質聯用法的原理,優點,分離方法以及應用，對于想要發高分文章，希望自己的數據被認可的客戶，可以了解一下。
液質聯用的原理：
液質聯用是以審計追蹤液相色譜為分離系統，質譜為檢測系統。樣品經過審計追蹤液相色譜分離后，流動相分流進入質譜儀，在離子源被電離，產生帶有一定電荷、質量數不同的離子。質譜儀依據不同離子在電磁場中的運動行為不同來檢測各個離子，根據每一個離子的質荷比（質量與電荷數比值）不同，顯示在色譜圖上，后通過對色譜圖的分析，得到樣品的檢測數據。
液質聯用法對于樣品的要求：
同任何其他分析方法一樣，樣品前處理在LC-MS分析中是重中之重的。對所用樣品，無論是什么類別，都有如下要求：
樣品清潔，盡量不含雜質，由于蛋白質和肽類在ESI上有很強的響應，這兩樣化合物尤其要注意；
樣品不宜含有高濃度的難揮發酸（磷酸，硫酸等）及其鹽，這些會引起液質聯用儀很強的噪聲；
為了防止堵塞柱子、噴口及毛細管入口，樣品的粘度不要太大。
液質聯用法用于樣品分離的常用方法：
1.固相萃取（SPE）
這是應用廣泛的處理樣品的方法，固定相是吸附劑，流動相是萃取過程中的水樣。當固定相與流動相接觸時，其中的某些痕量物質就保留在固定相中。這時用少量的選擇性溶劑洗脫，即可達到富集和純化目標物的目的。
分離方法的比較
方法優點缺點
液液萃取法儀器設備簡單，應用廣泛工作量大，溶劑消耗大，污染環境
蛋白沉淀操作簡單，儀器設備簡單檢測靈敏度低，非特異性沉淀
固相萃取回收率高，重現性好。需要建立方法，成本較高
2.阻定性進入介質：
阻定性進入介質（restricted access media，RAM)有兩層不同的表面，即外層表面與內層表面，外層表面通過體積排除作用僅允許小分子進入內層表面。內層表面通過傳統的分配作用“捕獲”被分析物。RAM介質常用于在大分子共存時小分子樣品的分離和富集.可有效地除去血液和尿液中的基質。
3.灌注固相萃取：
灌注填料是近些年才出現的一種填料，顆粒上同時有貫通型的孔以及擴散型的穴。這種填料制成的固相萃取用品或液相柱，可以以每min幾十ml的速度上樣，用于諸如培養基中蛋白質和肽類的分離、富集和脫鹽，具有不可比擬的優勢。
4.超濾：
超濾（ultrafiltration)是一種加壓膜分離技術，小分子溶質和溶劑在一定壓力下，穿過一定孔徑的特制的薄膜，過濾了大分子物質，從而達到純化大分子物質的目的。具有操作簡便，成本低廉，條件溫和等眾多優勢，但不能用于蛋白溶液。
5.免疫親和萃取：
免疫親和萃取是基于固相化的配基（抗體）和樣品之間的相互作用的樣品前處理方法，具有分離效率高、專屬性高等優點。其原理是分析物（抗原）結合特異性抗體，可以通過不同于樣品溶液PH或離子強度的緩沖液洗脫而達到分離和純化的目的。
液質聯用，即審計追蹤液相色譜 -質譜聯用技術，是目前很好的檢測技術，以其快速的分離能力、超高的靈敏度著稱.本文將介紹液質聯用法的原理,優點,分離方法以及應用，對于想要發高分文章，希望自己的數據被認可的客戶，可以了解一下。
液質聯用的原理：
液質聯用是以審計追蹤液相色譜為分離系統，質譜為檢測系統。樣品經過審計追蹤液相色譜分離后，流動相分流進入質譜儀，在離子源被電離，產生帶有一定電荷、質量數不同的離子。質譜儀依據不同離子在電磁場中的運動行為不同來檢測各個離子，根據每一個離子的質荷比（質量與電荷數比值）不同，顯示在色譜圖上，后通過對色譜圖的分析，得到樣品的檢測數據。
液質聯用法對于樣品的要求：
同任何其他分析方法一樣，樣品前處理在LC-MS分析中是重中之重的。對所用樣品，無論是什么類別，都有如下要求：
樣品清潔，盡量不含雜質，由于蛋白質和肽類在ESI上有很強的響應，這兩樣化合物尤其要注意；
樣品不宜含有高濃度的難揮發酸（磷酸，硫酸等）及其鹽，這些會引起液質聯用儀很強的噪聲；
為了防止堵塞柱子、噴口及毛細管入口，樣品的粘度不要太大。
液質聯用法用于樣品分離的常用方法：
1.固相萃取（SPE）
這是應用廣泛的處理樣品的方法，固定相是吸附劑，流動相是萃取過程中的水樣。當固定相與流動相接觸時，其中的某些痕量物質就保留在固定相中。這時用少量的選擇性溶劑洗脫，即可達到富集和純化目標物的目的。
分離方法的比較
方法優點缺點
液液萃取法儀器設備簡單，應用廣泛工作量大，溶劑消耗大，污染環境
蛋白沉淀操作簡單，儀器設備簡單檢測靈敏度低，非特異性沉淀
固相萃取回收率高，重現性好。需要建立方法，成本較高
2.阻定性進入介質：
阻定性進入介質（restricted access media，RAM)有兩層不同的表面，即外層表面與內層表面，外層表面通過體積排除作用僅允許小分子進入內層表面。內層表面通過傳統的分配作用“捕獲”被分析物。RAM介質常用于在大分子共存時小分子樣品的分離和富集.可有效地除去血液和尿液中的基質。
3.灌注固相萃取：
灌注填料是近些年才出現的一種填料，顆粒上同時有貫通型的孔以及擴散型的穴。這種填料制成的固相萃取用品或液相柱，可以以每min幾十ml的速度上樣，用于諸如培養基中蛋白質和肽類的分離、富集和脫鹽，具有不可比擬的優勢。
4.超濾：
超濾（ultrafiltration)是一種加壓膜分離技術，小分子溶質和溶劑在一定壓力下，穿過一定孔徑的特制的薄膜，過濾了大分子物質，從而達到純化大分子物質的目的。具有操作簡便，成本低廉，條件溫和等眾多優勢，但不能用于蛋白溶液。
5.免疫親和萃取：
免疫親和萃取是基于固相化的配基（抗體）和樣品之間的相互作用的樣品前處理方法，具有分離效率高、專屬性高等優點。其原理是分析物（抗原）結合特異性抗體，可以通過不同于樣品溶液PH或離子強度的緩沖液洗脫而達到分離和純化的目的。
