液相色譜儀各個(gè)分支需要注意的事項(xiàng)
更新時(shí)間：2020-10-12
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液相色譜儀是一種分離與分析儀器，其特點(diǎn)是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜儀發(fā)展的過程中，為了區(qū)分各種方法，根據(jù)固定相的形式產(chǎn)生了各自的命名，如：紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。
1、色譜儀氘燈：
色譜儀開始進(jìn)樣前30分鐘開氘燈即可，節(jié)約燈的能量和使用時(shí)間。
2、流動相的使用和注意事項(xiàng)：
?、偎昧鲃酉啾仨氼A(yù)先濾過和脫氣，流動相一般貯存于玻璃不銹鋼容器內(nèi)。貯存容器一定要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要長期貯存。容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物。
②配制流動相用水需為純凈水或經(jīng)超聲過濾后的純化水，流動相配制好后先用直徑為5cm，孔徑為0.45um的濾膜，通過沙芯過濾器的過濾，然后在超聲儀上超聲。
?、鄄坏脤⒀b流動相的容器直接放置與超聲儀內(nèi)，需放與篩網(wǎng)上進(jìn)行超聲。
3、六通閥的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)：
?、贅悠啡芤哼M(jìn)樣前必須用濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。
②轉(zhuǎn)動閥芯時(shí)不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的Zda壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時(shí)，過高的壓力將使柱頭損壞。
?、蹫榉乐咕彌_鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次色譜儀分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。
4、色譜柱柱壓升高的主要因素：
?、俦玫膯蜗蜷y堵塞。
②色譜柱的入口篩板堵塞。
③吸濾頭堵塞。
?、躊EEK管接口處堵塞。
5、色譜柱柱壓不穩(wěn)的因素：
?、?strong>液相色譜儀泵內(nèi)有空氣。
?、诒妹芊鈮|損壞。
③溶劑中的氣泡。
?、芟到y(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)。
6、樣品峰保留時(shí)間漂移的主要因素：
?、偈覂?nèi)溫度變化過大。
?、诹鲃酉喑煞职l(fā)生變化。
?、凵V儀色譜柱未平衡好。
?、苌V儀泵中有氣泡。
?、菰摿鲃酉嗍欠襁m宜此樣品的檢測。
7、基線漂移的主要因素：
?、僦鶞夭▌?。
②流動相不均勻。
?、哿魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w。
?、苌V儀檢測器出口阻塞。
?、萘鲃酉嗯浔炔划?dāng)或流速變化。
?、蘖鲃酉辔廴?、變質(zhì)。
⑦使用循環(huán)溶劑。
8、色譜儀檢測器靈敏度不夠的主要因素：
?、贅悠愤M(jìn)樣量不足。
②波長設(shè)置不正確。
?、蹤z測器池窗污染。
?、軝z測池中有氣泡。
?、蓦妷翰环€(wěn)。
⑥流動相流速不合適。
9、色譜柱的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)：
?、俦苊鈮毫蜏囟鹊募眲∽兓叭魏螜C(jī)械震動。柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?，反之亦然?/div>
③一般說來色譜儀色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
④選擇使用適宜的流動相(尤其是pH)，以避免固定相被破壞。
?、荼苊鈱?fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在色譜儀進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。
?、藿?jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。
?、弑４嫔V柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至次日或更長時(shí)間。
?、嗌V柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是濾片被堵塞，這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。
?、嵋怨枘z為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。色譜儀每次分析檢測完成后，*用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。
10、色譜儀樣品：
液相色譜儀樣品必須用直徑為2.5cm，孔徑為0.45um的濾膜針式過濾。如有明確要求需用離心過濾的，經(jīng)離心過濾后取上清液即可。
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